Pfu DNA Polymerase

Fabricante

Cellco Biotec

Datasheet (EN-US)

Código	Nome do Produto	Apresentação	Preço	Disponibilidade
POL-104XS	Pfu DNA Polymerase - XS Pack	100 unidades	R$360,94	Disponível em estoque
POL-104S	Pfu DNA Polymerase - S Pack	500 unidades	R$577,50	Disponível em estoque
POL-104M	Pfu DNA Polymerase - M Pack	1.000 unidades	R$924,00	Disponível em estoque
POL-104L	Pfu DNA Polymerase - L Pack	2 x 1.000 unidades	R$1.478,40	Disponível em estoque
POL-104XL	Pfu DNA Polymerase - XL Pack	4 x 1.000 unidades	R$2.365,44	Disponível em estoque

DNA polimerase com atividade proofreading - elevada acurácia

Pyrococcus furiosus, recombinante, E. coli

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Manuais

Pfu DNA Polimerase

Pfu Pol é a escolha ideal para aplicações onde a eficiência na amplificação e elevada fidelidade são necessárias. A enzima catalisa a polimerização de nucleotídeos na fita dupla de DNA na direção 5' → 3' mas não possui ativididade 5' → 3' exonuclease. Sua atividade proofreading 3 '→ 5' resulta em elevada fidelidade na síntese de DNA comparada com a Taq DNA Polimerase. Pfu Pol gera fragmento de PCR não coesivos (blunt). A enzima é altamente purificada e livre de DNA bacteriano.

Definição de unidade

Uma unidade é definida como a quantidade de enzima requerida para catalisar a incorporação de 10 nmoles de dNTPs em uma forma ácido-insolúvel em 30 minutos a 70 °C.

CONTEÚDO

Pfu Pol (blue cap)

2.5 unidades/µL Pfu DNA polimerase em 20 mM Tris-HCl, 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.5% Tween-20, 0.5% Nonidet P-40, 50% glicerol (v/v), pH 8.0 (25 °C)

Pfu Reaction Buffer complete 10x (red cap)

200 mM Tris-HCl, 100 mM KCl, 100 mM (NH₄)₂SO₄, 20 mM MgSO₄, 1% *(v/v) Triton X-100, 1 mg/mL BSA, pH 8.8 (25 °C)

PROTOCOLO

Apenas para uso in vitro!

Ensaio recomendado: 50 µL

Volume	[ final ]	Componente
5 µL	1 X	10x Pfu Reaction Buffer complete (red cap)
1 µL	200 µM	10 mM dNTPs
1 µL	0.2 µM	10 µM Oligonucleotídeo senso
1 µL	0.2 µM	10 µM Oligonucleotídeo antisenso
variável	50 pg - 1 µg	DNA molde
0.5 - 2 µL	1.25 - 5 unidades	Pfu Pol (blue cap)
q.s.p 50 µL		Água grau PCR

Condições de ciclagem recomendadas

Denaturação inicial	95 °C	1-3 min	1 X
Denaturação	95 °C	15-30 s	25-30 X
Hibridização¹	45-70 °C	15-30 s
Elongação²	72 °C	1 min/kb
Elongação final	72 °C	1-2 min/kb	1 X

¹ A temperatura de hibridização depende da temperatura denaturação (melting) do oligonucleotídeo empregado.

² O tempo de elongação depende do tamanho do fragmento que se pretende amplificar. Recomenda-se 1 min por kb.

TRANSPORTE E ARMAZENAGEM

Transportado em blue ice

Armazenada à -20 °C.

DOCUMENTOS

MANUAIS E PROTOCOLOS

Pfu Pol - Manual (En)

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- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.

Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)

Manual 1
Manual 2
Manual 3