
gDNA Removal Kit
gDNA Removal Kit foi desenvolvido para remoção de gDNA (contaminante) de amostras de RNA anterior a transcrição reversa. O kit é baseado em dsDNAse termolábeis recombinantes, que são inativadas irreversivelmente em temperaturas moderadas. Desta maneira, a etapa de inativação é gentil suficientemente para preservar a qualidade e quantidade do RNA produzido. A transcrição reversa pode ser realizada no mesmo tudo, minimizando etapas de pipetagem e ganhando tempo.
Remoção completa DNA genômico de RNA preps
A maioria das técnicas empregadas para o isolamento de RNA produzem RNA com quantidades significativas de DNA genômico (contaminante), com potencial de interferência na quantificação do mRNA. Este é um problema nas quantificações de transcritos de baixa cópia ou amostras pequenas. O gDNA Removal kit remove gDNA de RNA preps a níveis abaixo do limiar de detecção de RT-qPCR.
CONTEÚDO
gDNA Remover (red cap)
dsDNase termolábeis
Reaction Buffer (green cap)
10X concentrado
PROTOCOLO
O protocolo é recomendado para remoção de DNA genômico de preparações de RNA anterior a transcrição reversa.
Componente | Reação 10 µL | Reação 20 µL | Reação 50 µL |
10X Reaction Buffer | 1 µL | 2 µL | 5 µL |
gDNA Remover | 1 µL | 1 µL | 1 µL |
RNA prep | 8 µL | 17 µL | 44 µL |
Incubar
- 10 min a 37 °C ou 20 min a 25 °C
- 5 min a 58 °C para inativação das enzimas
Após o término do tratamento com dsDNase, os reagentes para transcrição reversa podem ser adicionados diretamente no tubo contendo o RNA purificado
TRANSPORTE E ARMAZENAGEM
Transportado em blue ice
Armazenada à -20 °C. Evite ciclos congelamento/descongelamento
DOCUMENTOS
MANUAIS E PROTOCOLOS
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Manual 2
Manual 3