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T7 RNA Polymerase

Fabricante

Jena Bioscience
Código Nome do Produto Apresentação Preço Qtd Disponibilidade
PCR-603S T7 RNA Polymerase - S Pack 4 Kunidades
R$555,17
Sob encomenda
Entrega: 15-45 dias

PCR-603L T7 RNA Polymerase - L Pack 20 Kunidades
R$2.220,69
Sob encomenda
Entrega: 15-45 dias

T7 RNA Polimerase
 

 

Logo Jena Bioscience

T7 RNA Polimerase

T7 RNA polimerase é uma RNA polimerase dependente de DNA que catalisa a síntese de RNA a partir de uma sequência promotora de T7. A enzima garante a transcrição eficiente de moldes de DNA contendo um promotor de T7.

 

Definição de unidade

Uma unidade é definida como a quantidade de enzima necessária para incorporar 1 nmol de AMP em um polinucleotídeo em 60 minutos a 37 °C.

 

Aplicações:

  • Síntese de RNA in vitro
  • Síntese de sondas de RNA
  • Geração de molde de RNA para tradução in vitro
  • Estudo de RNAi

 

Molde de DNA

Em geral, qualquer DNA (plasmídeo linearizado, produto de PCR) contendo um promotor T7 pode ser usado como molde para T7 RNA polimerase.
Sequencia mínima para transcrição eficiente: 5’ – TAATACGACTCACTATAGGGAGA...- 3’

 

CONTEÚDO

- T7 RNA Polimerase (tampa vermelha)

(200 unidades/µL em 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 5 mM DTT, 0,1 mg/mL BSA, 0,03% detergente ELUGENT, 50% glicerol (v/v), pH 8,0 (25 °C)

- 5X T7 Reaction Buffer (tampa verde)

(200 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 30 mM MgCl2, 50 mM DTT e 10 mM espermidina)


FORMA

Líquido


CONCENTRAÇÃO

200 unidades/µL


 

PROTOCOLO

Apenas para uso in vitro!

 

1. Preparação do ensaio de RT-PCR

Adicione os seguintes componentes em um microtubo livre de nuclease e em seguida vortexar gentilmente.

 

Componente [ estoque ] [ final ] Reação 20 µL Reação 50 µL
T7 Reaction Buffer 5 X 1 X 4 µL 10 µL
NTP mix 10 mM cada 500 µM cada 1 µL 2,5 µL
Inibidor de RNAse1 40 unidades/µL 1 unidades/µL 0,2 µL 0,5 µL
Molde de DNA com promotor T7 10-500 ng 10-1.000 ng
T7 RNA Polimerase 200 unidades/µL 2 unidades/µL 0,2 µL 0,5 µL
Água nuclease-free qsp 20 µL qsp 50 µL

1Adicionar 10-20 unidades de inibidor de RNase por reação é recomendado e pode ser essencial quando a quantidade inicial de RNA é baixa.

 

2. Incubação

Incubar a reação a 37 °C por 30 min.

Nota: Incubação a 42 °C pode aumentar o rendimento em até 10%. Para baixas quantidades de molde de DNA (<100ng) tempo de incubação de até 60 minutos é recomendado.

 

3. Tratamento com DNase opcional

Adicionar 1 unidade de DNase RNase-free a reação e incubar a 37 °C por 15 min para remoção do molde de DNA.

 

 

TRANSPORTE E ARMAZENAGEM

Transportado em blue ice

Armazenar à -20 °C. Evite ciclos de congelamento/descongelamento.

 

DOCUMENTOS

MANUAIS E PROTOCOLOS

 T7 RNA Polimerase - Manual (En)

 T7 RNA Polimerase - MSDS (En)

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- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Manual 1
Manual 2
Manual 3