T7 RNA Polymerase

Fabricante

Jena Bioscience

Datasheet (EN-US)

Código	Nome do Produto	Apresentação	Preço	Qtd	Disponibilidade
PCR-603S	T7 RNA Polymerase - S Pack	4 Kunidades	R$555,17		Sob encomenda Entrega: 15-45 dias
PCR-603L	T7 RNA Polymerase - L Pack	20 Kunidades	R$2.220,69		Sob encomenda Entrega: 15-45 dias

T7 RNA Polimerase

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Descrição
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Manuais

T7 RNA Polimerase

T7 RNA polimerase é uma RNA polimerase dependente de DNA que catalisa a síntese de RNA a partir de uma sequência promotora de T7. A enzima garante a transcrição eficiente de moldes de DNA contendo um promotor de T7.

Definição de unidade

Uma unidade é definida como a quantidade de enzima necessária para incorporar 1 nmol de AMP em um polinucleotídeo em 60 minutos a 37 °C.

Aplicações:

Síntese de RNA in vitro
Síntese de sondas de RNA
Geração de molde de RNA para tradução in vitro
Estudo de RNAi

Molde de DNA

Em geral, qualquer DNA (plasmídeo linearizado, produto de PCR) contendo um promotor T7 pode ser usado como molde para T7 RNA polimerase.
Sequencia mínima para transcrição eficiente: 5’ – TAATACGACTCACTATAGGGAGA...- 3’

CONTEÚDO

- T7 RNA Polimerase (tampa vermelha)

(200 unidades/µL em 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 5 mM DTT, 0,1 mg/mL BSA, 0,03% detergente ELUGENT, 50% glicerol (v/v), pH 8,0 (25 °C)

- 5X T7 Reaction Buffer (tampa verde)

(200 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 30 mM MgCl₂, 50 mM DTT e 10 mM espermidina)

FORMA

Líquido

CONCENTRAÇÃO

200 unidades/µL

PROTOCOLO

Apenas para uso in vitro!

1. Preparação do ensaio de RT-PCR

Adicione os seguintes componentes em um microtubo livre de nuclease e em seguida vortexar gentilmente.

Componente	[ estoque ]	[ final ]	Reação 20 µL	Reação 50 µL
T7 Reaction Buffer	5 X	1 X	4 µL	10 µL
NTP mix	10 mM cada	500 µM cada	1 µL	2,5 µL
Inibidor de RNAse¹	40 unidades/µL	1 unidades/µL	0,2 µL	0,5 µL
Molde de DNA com promotor T7			10-500 ng	10-1.000 ng
T7 RNA Polimerase	200 unidades/µL	2 unidades/µL	0,2 µL	0,5 µL
Água nuclease-free			qsp 20 µL	qsp 50 µL

¹Adicionar 10-20 unidades de inibidor de RNase por reação é recomendado e pode ser essencial quando a quantidade inicial de RNA é baixa.

2. Incubação

Incubar a reação a 37 °C por 30 min.

Nota: Incubação a 42 °C pode aumentar o rendimento em até 10%. Para baixas quantidades de molde de DNA (<100ng) tempo de incubação de até 60 minutos é recomendado.

3. Tratamento com DNase opcional

Adicionar 1 unidade de DNase RNase-free a reação e incubar a 37 °C por 15 min para remoção do molde de DNA.

TRANSPORTE E ARMAZENAGEM

Transportado em blue ice

Armazenar à -20 °C. Evite ciclos de congelamento/descongelamento.

DOCUMENTOS

MANUAIS E PROTOCOLOS

T7 RNA Polimerase - Manual (En)

T7 RNA Polimerase - MSDS (En)

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- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.

Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)

Manual 1
Manual 2
Manual 3