1. Categoria: DNA
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T7 RNA Polymerase Kit

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Jena Bioscience
Código Nome do Produto Apresentação Preço Qtd Disponibilidade
PCR-601S T7 RNA Polymerase Kit - S Pack 40 reações (20 µL)
R$543,28
Sob encomenda
Entrega: 15-45 dias

PCR-601L T7 RNA Polymerase Kit - L Pack 200 reações (20 µL)
R$2.173,10
Sob encomenda
Entrega: 15-45 dias

T7 RNA Polimerase Kit
 

 

Logo Jena Bioscience

T7 Transcription Kit

T7 Transcription Kit fornece reagentes otimizados para transcrição in vitro por T7 RNA polimerase. O kit contém todos os reagentes (incluindo molde controle) para obtenção de altos rendimentos de RNA dentro de um tempo mínimo de reação. Garante a transcrição eficiente de moldes de DNA contendo um promotor de T7.

 

Definição de unidade

Uma unidade é definida como a quantidade de enzima necessária para incorporar 1 nmol de AMP em um polinucleotídeo em 60 minutos a 37 °C.

 

Aplicações:

  • Síntese de RNA in vitro
  • Síntese de sondas de RNA
  • Geração de molde de RNA para tradução in vitro
  • Estudo de RNAi

 

Molde de DNA

Em geral, qualquer DNA (plasmídeo linearizado, produto de PCR) contendo um promotor T7 pode ser usado como molde para T7 RNA polimerase.
Sequencia mínima para transcrição eficiente: 5’ – TAATACGACTCACTATAGGGAGA...- 3’

 

CONTEÚDO

- T7 RNA Polimerase (tampa vermelha)

(200 unidades/µL em 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 5 mM DTT, 0,1 mg/mL BSA, 0,03% detergente ELUGENT, 50% glicerol (v/v), pH 8,0 (25 °C)

- 5X T7 Reaction Buffer (tampa verde)

(200 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 30 mM MgCl2, 50 mM DTT e 10 mM espermidina)

- NTP Mix (tampa branca)

(10 mM de cada NTP (ATP, CTP, GTP, UTP)

- T7 molde controle (tampa roxa)

(200 ng/µL, 1423 bp - incluindo sequência t7 promoter)

- Inibidor de RNase (tampa amarela)

(40 unidades/µL em tampão de armazenamento com 50% glicerol (v/v))

- Água RNAse-free (tampa branca)


FORMA

Líquido


 

PROTOCOLO

Apenas para uso in vitro!

 

1. Preparação do ensaio de RT-PCR

Adicione os seguintes componentes em um microtubo livre de nuclease e em seguida vortexar gentilmente.

 

Componente [ estoque ] [ final ] Reação 20 µL Reação 50 µL
T7 Reaction Buffer 5 X 1 X 4 µL 10 µL
NTP mix 10 mM cada 500 µM cada 1 µL 2,5 µL
Inibidor de RNAse1 40 unidades/µL 1 unidades/µL 0,2 µL 0,5 µL
Molde de DNA com promotor T7 10-500 ng 10-1.000 ng
T7 RNA Polimerase 200 unidades/µL 2 unidades/µL 0,2 µL 0,5 µL
Água nuclease-free qsp 20 µL qsp 50 µL

1Adicionar 10-20 unidades de inibidor de RNase por reação é recomendado e pode ser essencial quando a quantidade inicial de RNA é baixa.

 

2. Incubação

Incubar a reação a 37 °C por 30 min.

Nota: Incubação a 42 °C pode aumentar o rendimento em até 10%. Para baixas quantidades de molde de DNA (<100ng) tempo de incubação de até 60 minutos é recomendado.

 

3. Tratamento com DNase opcional

Adicionar 1 unidade de DNase RNase-free a reação e incubar a 37 °C por 15 min para remoção do molde de DNA.

 

 

TRANSPORTE E ARMAZENAGEM

Transportado em blue ice

Armazenar à -20 °C. Evite ciclos de congelamento/descongelamento.

 

DOCUMENTOS

MANUAIS E PROTOCOLOS

 T7 Transcription Kit - Manual (En)

 T7 Transcription Kit- MSDS (En)

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- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Manual 1
Manual 2
Manual 3