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Pfu-X Polymerase

Fabricante

Jena Bioscience
Código Nome do Produto Apresentação Preço Qtd Disponibilidade
PCR-207S Pfu-X Polymerase - S Pack 100 unidades
R$605,62
Disponível em estoque

PCR-207L Pfu-X Polymerase - L Pack 500 unidades
R$2.422,49
Sob encomenda
Entrega: 15-45 dias

DNA polimerase com atividade proofreading - elevada acurácia

Pyrococcus furiosus, recombinante, E. coli

 
Logo Jena Bioscience

 

Pfu-X Polymerase

Pfu-X polymerase é a escolha ideal para aplicações onde a eficiência na amplificação e elevada fidelidade são necessárias. A enzima é uma versão geneticamente modificada da Pfu DNA polimerase, apresentando 2X maior acurácia e processividade aumentada, resultando em tempos de amplificação menores. A enzima catalisa a polimerização de nucleotídeos na fita dupla de DNA na direção 5' - 3'mas não possui ativididade 5'-3' exonuclease. Sua atividade proofreading 3'5' resulta em elevada fidelidade na síntese de DNA comparada com a Taq DNA Polimerase. Pfu-X Polymerase gera fragmento de PCR não coesivos (blunt). A enzima é altamente purificada e livre de DNA bacteriano.

Definição de unidade

Uma unidade é definida como a quantidade de enzima requerida para catalisar a incorporação de 10 nmoles de dNTPs em uma forma ácido-insolúvel em 30 minutos a 70 °C.

 

CONTEÚDO

Pfu-X Pol (red cap)

2.5 unidades/µL Pfu-X Polymerase em tampão de armazenamento

 

Pfu-X Buffer (green cap)

10X concentrado

 

PROTOCOLO

Apenas para uso in vitro!

Ensaio recomendado: 50 µL

Volume [ final ] Componente
5 µL 1 X 10x Pfu-X Buffer (green cap)
1 µL 200 µM 10 mM dNTPs
1 µL 0.2 µM 10 µM Oligonucleotídeo senso
1 µL 0.2 µM 10 µM Oligonucleotídeo antisenso
variável 1 - 100 ng DNA molde
0.5 µL 1.25 unidades Pfu-X Pol (red cap)
q.s.p 50 µL Água grau PCR

 

Condições de ciclagem recomendadas

Denaturação inicial 95 °C 2 min 1 X
Denaturação 95 °C 20 s 25-30 X
Hibridização1 50-68 °C 30 s
Elongação2 68 °C 1 min/kb
Elongação final 68 °C 1 min/kb 1 X

1 A temperatura de hibridização depende da temperatura denaturação (melting) do oligonucleotídeo empregado.

2 O tempo de elongação depende do tamanho do fragmento que se pretende amplificar. Recomenda-se 1 min por kb.

 

Protocolo de amplificação de 2 etapas para fragmentos longos (>3 kb)

Note que para realizar o protocolo de amplificação de 2 etapas é necessário que o TM dos oligonucleotídeos empregados seja alta. Se os oligonucleotídeos apresentarem TM inferior a 65 °C ou o protocolo de duas etapas fornecer rendimento inadequado o protocolo de 3 etapas é o recomendado.

Denaturação inicial 95 °C 2 min 1 X
Denaturação 95 °C 20 s 25-30 X
Hibridização/Elongação2 68 °C 30 s/kb
Elongação final 68 °C 30 s/kb 1 X

1 A temperatura de hibridização depende da temperatura denaturação (melting) do oligonucleotídeo empregado.

2 O tempo de elongação depende do tamanho do fragmento que se pretende amplificar. Recomenda-se 1 min por kb.

 

TRANSPORTE E ARMAZENAGEM

Transportado em blue ice

Armazenada à -20 °C.

 

DOCUMENTOS

MANUAIS E PROTOCOLOS

 Pfu-X Pol - Datasheet

 Standard PCR - Product Selection Guide

 

MSDS

 Pfu-X Pol - MSDS

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- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Manual 1
Manual 2
Manual 3