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High Fidelity Hot Start Pol

Fabricante

Jena Bioscience
Código Nome do Produto Apresentação Preço Qtd Disponibilidade
PCR-205S High Fidelity Hot Start Pol - S Pack 100 unidades
R$651,47
Disponível em estoque

PCR-205L High Fidelity Hot Start Pol - L Pack 500 unidades
R$2.605,89
Sob encomenda
Entrega: 15-45 dias

DNA polimerase termoativável para alta especificidade e fidelidade, bloqueada por aptâmero


Thermus aquaticus, recombinante, E. coli


 
Logo Jena Bioscience

 

High Fidelity Hot Start Pol

High Fidelity Hot Start Pol é um mix de Taq DNA polimerase e uma enzima proofreading especialmente desenvolvida para elevada acurácia e eficiente amplificação. A atividade da polimerase é bloqueada a temperatura ambiente e reestabelecida automaticamente durante o primeiro passo de denaturação. Este processo de termo-ativação previne a extensão de oligonucleotídeos não especificamente hibridizados e formação de dímeros de oligonucleotídeos durante o preparo da reação de PCR. Apresenta resultados execelentes para amplificação extremamente longas (até 30 Kb), ricos em GC e outros moldes difíceis. A mistura enzimática conta com uma polimerase com alta processividade 5'- 3' e ausência da atividade 5' - 3' exonuclease. A presença de atividade de correção (proofreading ) 3' - 5' resulta em aumento significativo da fidelidade durante a síntese de DNA comparado com a Taq DNA polimerase. A enzima é altamente purificada e livre de DNA bacteriano.

Etapa de ativação

High Fidelity Hot Start Pol não requer qualquer etapa de aquecimento/denaturação prolongada. O aptâmero responsável pela inibição da atividade de polimerase é rapidamente liberado com o aumento da temperatura durante o primeira etapa de denaturação.

Definição de unidade

Uma unidade é definida como a quantidade de enzima requerida para catalisar a incorporação de 10 nmoles de dNTPs em uma forma ácido-insolúvel em 30 minutos a 70 °C.

 

CONTEÚDO

High Fidelity Hot Start Pol (red cap)

2.5 unidades/µL High Fidelity Hot Start Polymerase em tampão de armazenagem

 

High Fidelity Buffer (green cap)

10X concentrado

 

PROTOCOLO

Apenas para uso in vitro!

Ensaio recomendado: 50 µL

Volume [ final ] Componente
5 µL 1 X 10x High Fidelity Buffer (green cap)
1 µL 200 µM 10 mM dNTPs
1 µL 0.2 - 0.5 µM 10 µM Oligonucleotídeo senso
1 µL 0.2 - 0.5 µM 10 µM Oligonucleotídeo antisenso
variável 1 - 100 ng DNA molde
0.5 µL 1.25 unidades High Fidelity Hot Start Pol (red cap)
q.s.p 50 µL Água grau PCR

 

Condições de ciclagem recomendadas

Denaturação inicial 95 °C 2 min 1 X
Denaturação 95 °C 20 s 20-30 X
Hibridização1 50-68 °C 30 s
Elongação2 68 °C 1 min/kb
Elongação final 68 °C 1 min/kb 1 X

1 A temperatura de hibridização depende da temperatura denaturação (melting) do oligonucleotídeo empregado.

2 O tempo de elongação depende do tamanho do fragmento que se pretende amplificar. Recomenda-se 1 min por kb.

 

TRANSPORTE E ARMAZENAGEM

Transportado em blue ice

Armazenada à -20 °C.

 

DOCUMENTOS

MANUAIS E PROTOCOLOS

 High Fidelity Hot Start Pol - Datasheet

 Standard PCR - Product Selection Guide

 

MSDS

 High Fidelity Hot Start Pol - MSDS

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- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Manual 1
Manual 2
Manual 3