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Hot Start Pol

Fabricante

Jena Bioscience
Código Nome do Produto Apresentação Preço Qtd Disponibilidade
PCR-203S Hot Start Pol - S Pack 200 unidades
R$466,75
Disponível em estoque

PCR-203L Hot Start Pol - L Pack 1.000 unidades
R$1.867,01
Sob encomenda
Entrega: 15-45 dias

DNA polimerase termoativável para alta especificidade, bloqueada por aptâmero


Thermus aquaticus, recombinante, E. coli


 
Logo Jena Bioscience

 

Taq DNA Polimerase

Hot Start Pol fornece especificidade e sensibilidade elevadas quando a reação de PCR é conduzida com DNA molde de baixa cópia em condições reacionais complexas ou quando o preparo da reação (temperatura ambiente) é demasiadamente prolongado. A atividade da polimerase é bloqueada a temperatura ambiente e reestabelecida automaticamente durante o primeiro passo de denaturação. Este processo de termoativação previne a extensão de oligonucleotídeos não especificamente hibridizados e formação de dímeros de oligonucleotídeos durante o preparo da reação de PCR. A atividade replicativa de DNA acontece a 72˚C. Cataliza a polimerização de nucleotídeos em dupla fita de DNA na direção 5'- 3' na presença de magnésio. Também possui atividade exonuclease no sentido 5'- 3' dependente de polimerização, mas a atividade exonuclease 3'- 5' é ausente.

Etapa de ativação

Hot Start Pol não requer qualquer etapa de aquecimento/denaturação prolongada. O aptâmero responsável pela inibição da atividade de polimerase é rapidamente liberado com o aumento da temperatura durante o primeira etapa de denaturação.

Definição de unidade

Uma unidade é definida como a quantidade de enzima requerida para catalisar a incorporação de 10 nmoles de dNTPs em uma forma ácido-insolúvel em 30 minutos a 70 °C.

 

CONTEÚDO

Hot Start Pol (red cap)

5 unidades/µL Taq DNA polimerase em 20 mM Tris-HCl, 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.5% Tween-20, 0.5% Nonidet P-40, 50% glicerol (v/v), pH 8.0 (25 °C)

 

Hot Start Buffer complete 10X (green cap)

200 mM Tris-HCl, 500 mM KCl, 15 mM MgCl2, pH 8.5 (25 °C)

 

MgCl2 Stock Solution (yellow cap)

25 mM MgCl2

 

PROTOCOLO

Apenas para uso in vitro!

Ensaio recomendado: 50 µL

Volume [ final ] Componente
5 µL 1 X 10x Hot Start Buffer complete (green cap)
1 µL 200 µM 10 mM dNTPs
1 µL 0.2 µM 10 µM Oligonucleotídeo senso
1 µL 0.2 µM 10 µM Oligonucleotídeo antisenso
variável 2 - 50 ng DNA molde
0.2-0.5 µL 1 - 2.5 unidades Hot Start Pol (red cap)
q.s.p 50 µL Água grau PCR

 

Otimização da concentração de MgCl2

A concentração de 1.5 mM Mg+2 é recomendada para a maioria das aplicações. Para otimização em casos particulares, adicione a solução estoque de MgCl2 conforme a tabela abaixo:

 

MgCl2 Stock Solution 1 µL 2 µL 3 µL 5 µL
[ final ] MgCl2 2 mM 2.5 mM 3 mM 4 mM

 

Condições de ciclagem recomendadas

Denaturação inicial 94 °C 2 min 1 X
Denaturação 94 °C 30 s 30 X
Hibridização1 45-68 °C 30 s
Elongação2 72 °C 30 s - 4 min
Elongação final 72 °C 2 min 1 X

1 A temperatura de hibridização depende da temperatura denaturação (melting) do oligonucleotídeo empregado.

2 O tempo de elongação depende do tamanho do fragmento que se pretende amplificar. Recomenda-se 1 min por kb.

 

TRANSPORTE E ARMAZENAGEM

Transportado em blue ice

Armazenada à -20 °C.

 

DOCUMENTOS

MANUAIS E PROTOCOLOS

 Hot Start Pol - Datasheet

 Standard PCR - Product Selection Guide

 

MSDS

 Hot Start Pol - MSDS

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- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Manual 1
Manual 2
Manual 3