Agarose Gel Extraction Kit
Agarose Gel Extraction Kit é planejado para recuperação com alto rendimento de DNA a partir de géis de agarose, com purificação simultânea (eliminação de dímeros de oligonucleotideos, oligos, proteínas, sais, agarose, brometo de etídeo e outras impurezas). A preparação é baseada na tecnologia de membrana de sílica para ligação do DNA em ambiente com concentração salina elevada e eluição em tampão com baixa concentração salina. O kit fornece uma maneira simples e eficiente de purificar DNA circulares ou lineares em ampla faixa de tamanhos (100 bp - 10 kbp) e é otimizada para quantidades de DNA de até 20 µg. Não requer extração com solventes orgânicos ou precipitação e garante rendimentos elevados e reprodutíveis.
CONTEÚDO
Extraction Buffer
Activation Buffer
Washing Buffer (antes de usar, adicione 96-99% Etanol conforme indicações do frasco)
Elution Buffer
Spin Columns
tubos coletores 2 mL
Material Adicional
96-99% Etanol
Isopropanol
Microtubo 1.5 mL
| Buffer | PP-202XS 10 preps |
PP-202S 50 preps |
PP-202L 250 preps |
| Extraction Buffer | 15 mL | 75 mL | 2 x 185 mL |
| Activation Buffer | 1.2 mL | 6 mL | 30 mL |
| Washing Buffer | Adicione 12 mL Etanol Volume Final: 15 mL |
Adicione 64 mL Etanol Volume Final: 80 mL |
Adicione 160 mL Etanol Volume Final: 200 mL |
| Elution Buffer | 1 mL | 5 mL | 25 mL |
PROTOCOLO
Apenas para uso in vitro!
O uso de isopropanol é recomendado para fragmentos menores de 200 bp ou maiores que 5 kbp. A etapa de lavagem secundária (opcional) minimiza o conteúdo salino do produto purificado, porém reduz significativamente o rendimento dos fragmento de DNA menores de 200 bp.
1 Excisão da banda do gel
- Corte a área do gel referente ao fragmento de interesse e transfira para um microtubo de 1.5 mL
2 Preparo da Amostra
- Adicione 3 volumes de Extraction Buffer para 1 volume de gel cortado. Por exemplo, adicione 300 µL de Extraction Buffer para cada 100 mg (approx. 100 µL) de gel. Para géis contendo > 2.5% agarose, adicione 6 volumes de Extraction Buffer por volume de gel;
- Incube à 60 °C por 10 min, com homogenização eventual para assegurar completa dissolução do gel;
- Para fragmentos de DNA menores que 200 bp ou maiores que 5 kbp e para aumentar o rendimento adicione 1 volume de isopropanol por volume de gel dissolvido e misture bem.
3 Ativação da coluna
- Coloque a spin column em um tubo coletor de 2 mL;
- Adicione 100 µL de Activation Buffer na coluna;
- Centrifugue a 10.000 g por 30 s.
4 Carregamento da coluna
- Aplique a mistura gerada na etapa 1 na spin column ativada;
- Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
- Descarte o que passou pela coluna.
5 Lavagem coluna
- Adicione 700 µL de Washing Buffer na coluna;
- Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
- Descarte o que passou pela coluna;
Lavagem Secundária (opcional): Recomendada apenas para fragmentos de DNA menores que 200 bp, se DNA altamente puro (para sequenciamento, transfecção, etc.) for necessário.
- Adicione 700 µL de Washing Buffer na coluna;
- Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
- Descarte o que passou pela coluna;
- Centrifugue a 10.000 g por 2 min para remover qualquer resíduo de Washing Buffer.
6 Eluição
- Coloque a coluna em um microtubo de 1.5 mL novo;
- Adicione 30-50 µL de Elution Buffer ou água no centro da coluna;
- Incube por 1 min à temperatura ambiente;
- Centrifugue a 10.000 g por 1 min para eluir o DNA.
TRANSPORTE E ARMAZENAGEM
Transportado em temperatura ambiente
Armazenada à temperatura ambiente
DOCUMENTOS
MANUAIS E PROTOCOLOS
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Manual 2
Manual 3
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