Agarose Gel Extraction Kit

Fabricante

Cellco Biotec

Datasheet (EN-US)

Código	Nome do Produto	Apresentação	Preço	Qtd	Disponibilidade
DPK-105S	Agarose Gel Extraction Kit - S Pack	50 preparações	R$340,50		Disponível em estoque
DPK-105L	Agarose Gel Extraction Kit - L Pack	250 preparações	R$1.396,50		Disponível em estoque

Purificação de DNA de géis de agarose - Spin column

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Descrição
Conteúdo
Condição de transporte e armazenamento
Manuais

Agarose Gel Extraction Kit

Agarose Gel Extraction Kit é planejado para recuperação com alto rendimento de DNA a partir de géis de agarose, com purificação simultânea (eliminação de dímeros de oligonucleotideos, oligos, proteínas, sais, agarose, brometo de etídeo e outras impurezas). A preparação é baseada na tecnologia de membrana de sílica para ligação do DNA em ambiente com concentração salina elevada e eluição em tampão com baixa concentração salina. O kit fornece uma maneira simples e eficiente de purificar DNA circulares ou lineares em ampla faixa de tamanhos (100 bp - 10 kbp) e é otimizada para quantidades de DNA de até 20 µg. Não requer extração com solventes orgânicos ou precipitação e garante rendimentos elevados e reprodutíveis.

CONTEÚDO

Extraction Buffer

Activation Buffer

Washing Buffer (antes de usar, adicione 96-99% Etanol conforme indicações do frasco)

Elution Buffer

Spin Columns

tubos coletores 2 mL

Material Adicional

96-99% Etanol

Isopropanol

Microtubo 1.5 mL

Buffer	PP-202XS 10 preps	PP-202S 50 preps	PP-202L 250 preps
Extraction Buffer	15 mL	75 mL	2 x 185 mL
Activation Buffer	1.2 mL	6 mL	30 mL
Washing Buffer	Adicione 12 mL Etanol Volume Final: 15 mL	Adicione 64 mL Etanol Volume Final: 80 mL	Adicione 160 mL Etanol Volume Final: 200 mL
Elution Buffer	1 mL	5 mL	25 mL

PROTOCOLO

Apenas para uso in vitro!

O uso de isopropanol é recomendado para fragmentos menores de 200 bp ou maiores que 5 kbp. A etapa de lavagem secundária (opcional) minimiza o conteúdo salino do produto purificado, porém reduz significativamente o rendimento dos fragmento de DNA menores de 200 bp.

1 Excisão da banda do gel

Corte a área do gel referente ao fragmento de interesse e transfira para um microtubo de 1.5 mL

2 Preparo da Amostra

Adicione 3 volumes de Extraction Buffer para 1 volume de gel cortado. Por exemplo, adicione 300 µL de Extraction Buffer para cada 100 mg (approx. 100 µL) de gel. Para géis contendo > 2.5% agarose, adicione 6 volumes de Extraction Buffer por volume de gel;
Incube à 60 °C por 10 min, com homogenização eventual para assegurar completa dissolução do gel;
Para fragmentos de DNA menores que 200 bp ou maiores que 5 kbp e para aumentar o rendimento adicione 1 volume de isopropanol por volume de gel dissolvido e misture bem.

3 Ativação da coluna

Coloque a spin column em um tubo coletor de 2 mL;
Adicione 100 µL de Activation Buffer na coluna;
Centrifugue a 10.000 g por 30 s.

4 Carregamento da coluna

Aplique a mistura gerada na etapa 1 na spin column ativada;
Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
Descarte o que passou pela coluna.

5 Lavagem coluna

Adicione 700 µL de Washing Buffer na coluna;
Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
Descarte o que passou pela coluna;

Lavagem Secundária (opcional): Recomendada apenas para fragmentos de DNA menores que 200 bp, se DNA altamente puro (para sequenciamento, transfecção, etc.) for necessário.

Adicione 700 µL de Washing Buffer na coluna;
Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
Descarte o que passou pela coluna;
Centrifugue a 10.000 g por 2 min para remover qualquer resíduo de Washing Buffer.

6 Eluição

Coloque a coluna em um microtubo de 1.5 mL novo;
Adicione 30-50 µL de Elution Buffer ou água no centro da coluna;
Incube por 1 min à temperatura ambiente;
Centrifugue a 10.000 g por 1 min para eluir o DNA.

TRANSPORTE E ARMAZENAGEM

Transportado em temperatura ambiente

Armazenada à temperatura ambiente

DOCUMENTOS

MANUAIS E PROTOCOLOS

Agarose Gel Extraction Kit - Manual (En)

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- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.

Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)

Manual 1
Manual 2
Manual 3