Últimos Adicionados
SHOPPING BAG
Nenhum produto no carrinho.
Bem-vindo à Cellco
T4 DNA Ligase

Fabricante

Cellco Biotec
Código Nome do Produto Apresentação Preço Qtd Disponibilidade
ENZ-101S T4 DNA Ligase - S Pack 100 unidades
R$247,50
Disponível em estoque

ENZ-101M T4 DNA Ligase - M Pack 250 unidades
R$394,60
Disponível em estoque

ENZ-101L T4 DNA Ligase - L Pack 2 x 250 unidades
R$656,50
Disponível em estoque

ENZ-101XL T4 DNA Ligase - XL Pack 4 x 250 unidades
R$1.077,40
Disponível em estoque

T4 DNA Ligase


recombinante, E. coli

 

 

 

 

 

 

DESCRIÇÃO

T4 DNA Ligase catalisa a formação de ligações fosfodiéster entre extremidades 5'-fosfato e 3'hidroxil terminais de DNA ou RNA dupla fita.

 

Definição de unidade

Uma unidade Weiss é definida como a quantidade de enzima requerida para catalisar a ligação superior a 95% de fragmentos λ/HindIII a 16 ºC em 20 minutos.

 

Condições recomendadas

Para reações de ligações típicas com 100-200 ng de vetor emprega-se 0.1 - 1 WU. A ligação ótima ocorre a 16 ºC.

Empregando o tampão 2X Fast Ligation Buffer a ligação de fragmentos coesivos acontece em até 5 minutos e não-coesivos em 15 minutos.

Ensaio de ligação de DNA.

A - 1 µg de DNA lambda digerido com HindIII.
B - Ligação seguindo o protocolo de ligação padrão

 

 

CONTEÚDOVoltar ao topo

T4 DNA Ligase (tampa azul)

2.5 Weiss unidades/µL T4 DNA Ligase em 10 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 µg/mL BSA, 50% glicerol (v/v), pH 7.4 (25 °C)

 

10X Reaction Buffer (tampa vermelha)

500 mM Tris-HCl, 100 mM MgCl2, 100 mM DTT, 10 mM ATP, 25 µg/mL BSA, pH 7.8 (25 °C)

 

2X Fast Ligation Buffer(tampa vermelha)

60 mM Tris-HCl, 20 mM MgCl2, 20 mM DTT, 2 mM ATP, 10% PEG, pH 7.8 (25 °C)

 

 

PROTOCOLOVoltar ao topo

Apenas para uso in vitro!

 

Ligação de DNA

Recomenda-se usar uma relação molar de DNA de 1:1, 1:3 ou 3:1 de vetor:inserto para clonagem de um inserto em plasmídeo digerido. Reações de ligação padrão utilizam 100–200 ng de DNA vetor.

 

  1. Ligação Padrão
  2.  

    • Monte a seguinte reação em um microtubo estéril. Exemplo para uma reação de relação 1:1 vetor:inserto:

     

    Componente Reação (20 µL)
    Tampão T4 DNA Ligase 10X 2 µL
    Vetor (3 kb) 100 ng
    Inserto (0.5 kb) 17 ng
    T4 DNA Ligase 0.1 - 1 WU
    Água ultra pura qsp 20 µL
    • Incubar a reação 16 °C por 2-6 horas ou a 4 °C por 16 horas ou mais.

     

  3. Ligação Rápida
  4.  

    • Monte a seguinte reação em um microtubo estéril. Exemplo para uma reação de relação 1:1 vetor:inserto:

     

    Componente Reação (20 µL)
    Tampão T4 DNA Ligase 2X 10 µL
    Vetor (3 kb) 100 ng
    Inserto (0.5 kb) 17 ng
    T4 DNA Ligase 0.1 - 1 WU
    Água ultra pura qsp 20 µL
    • Incubar a reação 16 °C ou temperatura ambiente por 20 minutos.

 

Notas

  • A unidade de ligação coesiva (CEU) é definida como a quantidade de enzima necessária para ligar 50% de fragmentos λ/HindIII em reação de 20 µL em 1X tampão de ligação de T4 DNA Ligase por 30 minutos (16 ºC)
  • Uma unidade Weiss equivale a aproximadamente 67 CEU
  • T4 DNA Ligase é altamente inibida por concentrações de NaCl ou KCl superiores a 200 mM.
  • A ligação de fragmentos não-coesivos ou de base única requer 50 vezes mais enzima para obter a mesma eficiência de ligação de framentos coesivos. A eficiência deste tipo de ligação pode ser aumentada com o emprego do tampão 2X Fast Ligation Buffer
  • Para diluir a T4 DNA Ligase e consequente armazenamento em -20 ºC deverá ser empregado tampão contendo 50% glicerol. Para diluições e uso imediato, recomenda-se 1X Reaction Buffer.

 

 

TRANSPORTE E ARMAZENAGEMVoltar ao topo

Transportado em blue ice

Armazenada à -20 °C. Evitar ciclos de congelamento/descongelamento

 

 

 

DOCUMENTOSVoltar ao topo

MANUAIS E PROTOCOLOS

  T4 DNA Ligase - Manual (En)

Voltar ao topo

- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Manual 1
Manual 2
Manual 3