DESCRIÇÃO
Exonuclease I catalisa a remoção de nucleotídeos de DNA simples fita na direção 3' → 5'.
Definição de unidade
Uma unidade é definida como a quantidade de enzima necessária para catalisar a liberação de 10 nmoles de nucleotídeos ácido-solúveis em uma reação com volume final de 50 µL conduzida a 37°C por 30 minutos
Aplicações
- Remoção de DNA simples fita (ssDNA), incluindo oligonucleotídeos, de misturas reacionais.
Notas
- Não degrada DNA dupla fita ou RNA.
- Requer Mg+2 e presença de extremidades hidroxilas na posição 3' livres.
- Enzima ativa em uma variedade de condições tamponantes, permitindo sua adição direta na maioria das misturas reacionais.
Ensaio de remoção de oligo(ssDNA).
Na imagem acima evidencia-se a degradação eliminação completa do oligo e manutenção da integridade do DNA dupla fita (Fragmento de 500 bp)
CONTEÚDOVoltar ao topo
Exonuclease I (tampa azul)
20 U/µL em tampão 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT e 50% (v/v) glicerol.
10X Reaction Buffer (tampa vermelha)
670 mM Glicina-KOH (pH 9,5 - 25 °C), 100 mM 2-mercaptoetanol e 67 mM MgCl2
PROTOCOLOVoltar ao topo
Apenas para uso in vitro!
TRANSPORTE E ARMAZENAGEMVoltar ao topo
Transportado em blue ice
Armazenada à -20 °C. Evitar ciclos de congelamento/descongelamento
DOCUMENTOSVoltar ao topo
MANUAIS E PROTOCOLOS
- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Manual 1
Manual 2
Manual 3
Manual 2
Manual 3
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