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Sfi I

Fabricante

Jena Bioscience
Código Nome do Produto Apresentação Preço Qtd Disponibilidade
EN-132S Sfi I - S Pack 400 unidades
R$241,99
Disponível em estoque

EN-132L Sfi I - L Pack 5 x 400 unidades
R$967,97
Sob encomenda
Entrega: 15-45 dias

Streptomyces fimbriatus

 
Logo Jena Bioscience

 

Sítio de restrição

5'- G G C C N    N N NN G G C C - 3'
3'- C C G G NN N N    N C C G G - 5'

 

FONTE

Streptomyces fimbriatus

DEFINIÇÃO DE UNIDADES

Uma unidade de atividade de endonuclease de restrição é definida como a quantidade de enzima necessária para a completa digestão de 1 µg de Adenovirus-2 DNA (3 sítios) em um volume de 50 µL em 1 hora, nas condições experimentais ótimas.

 

CONTEÚDO

FORMA

Líquido - 5 mM Tris-HCl pH 7.4, 300 mM NaCl, 5 mM KPO4, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 500 µg/ml BSA, 0.15% Triton X-100 e 50% (v/v) glicerol
Concentração: 10 unidades/µL

Acompanhado de 10X UB (Universal Buffer)

 

PROTOCOLO

Apenas para uso in vitro!

Ensaio recomendado: 50 µL

5 µL 10X Universal Buffer (UB)
1 µg DNA1 puro ou produto de PCR2
5 unidades enzima selecionada
q.s.p 50 µL Água grau PCR

1 DNA superespiralado ou DNA alto peso molecular (e.g. DNA genômico de planta) podem requerer tempos de incubação superior ou maior quantidade de enzima

2 Algumas enzimas podem requerem bases adicionais ao sítios de restrição para completa digestão

 

  • O volume de enzima não deve ultrapassar 10% do volume total da reação.
  • Adicione a enzima por último. Homogeneizar todos os componentes antes de adicionar a enzima. Após a adição da enzima, homegeneizar por pipetagem. Não utilizar o vortex!
  • Incubar 60 min a 50 °C.
  • Pare a reação com uma das seguintes alternativas:
    - Adição de 2.1 µL de EDTA pH 8.0 [0.5 M], [final] = 20 mM
    - Inativação por calor (Não)
    - Purificação por Spin Column (e.g. PCR Purification Kit)
    - Eletroforose em gel e Excisão de banda única (e.g. Agarose Gel Extraction Kit)
    - Extração por clorofórmio ou precipitação por etanol

 

Digestão Dupla - Compatibilidade de tampões

B1 - 75-100% Atividade relativa

B2 - 100% Atividade relativa

B3 - 25-50% Atividade relativa

B4 - 10-25% Atividade relativa

B5 - 75-100% Atividade relativa

1X UB - 100% Atividade relativa (recomendado)

Por favor, note que a condição ótima para digestão com esta enzima é 1X UB. Com o sistema de tampão universal (UB), a grande maioria das enzimas da Jena Bioscience desempenham 100% da atividade relativa em 1X UB e apenas algumas em 0,5X ou 2X UB. Se as condições ótimas para a segunda enzima forem diferentes das recomendadas para a primeira enzima, sugerimos proceder primeiramente com a reação que emprega a maior concentração de UB, logo após, diluir a reação ajustando a concentração do UB para proceder com a segunda reação de digestão.

 

Guia de Tampões

Buffer 1 [ 10X ]
100 mM Tris-HCl (pH 7.9)
100 mM MgCl2
1000 µg/mL BSA
Buffer 2 [ 10X ]
100 mM Tris-HCl (pH 7.9)
100 mM MgCl2
500 mM NaCl
1000 µg/mL BSA
Buffer 3 [ 10X ]
500 mM Tris-HCl (pH 7.9)
100 mM MgCl2
1000 mM NaCl
1000 µg/mL BSA
Buffer 4 [ 10X ]
100 mM Tris-HCl (pH 7.9)
100 mM MgCl2
1500 mM NaCl
1000 µg/mL BSA
Buffer 5 [ 10X ]
200 mM Tris-acetato (pH 7.9)
100 mM Mg-acetato2
500 mM K-acetato
1000 µg/mL BSA

 

Compatibilidade dos Tampões

As enzimas da Jena Bioscience são totalmente compatíveis com sistemas tamponantes e enzimas de restrição de outros fabricantes, e portanto, podem ser empregadas em conjunto em reações de digestão dupla. Para otimizar os resultados, consulte os manuais correspondentes de todos os produtos envolvidos.

 

Ligação e re-digestão

Após digestão com excesso de 10X com Sfi I, >90% dos fragmentos de DNA podem ser religados e re-digeridos com esta enzima.

 

Metilação do DNA

Sem Inibição: dam
Inibição (Prejudicada por sobreposição): dcm
Inibição (Bloqueio por combinação de algumas sobreposições): CpG

 

Controle de qualidade

Todas as enzimas são avaliadas para contaminação endonuclease, 5'exonuclease/5'fosfatase, bem como, atividade de DNase simples e dupla fita não específicas.

 

TRANSPORTE E ARMAZENAGEM

Transportado em blue ice

Armazenada à -20 °C.

 

DOCUMENTOS

MANUAIS E PROTOCOLOS

 Sfi I - Datasheet

 Jena Bioscience - Restriction Enzymes Finder

 Jena Bioscience - Restriction Poster

 

MSDS

 Sfi I - MSDS

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- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Manual 1
Manual 2
Manual 3