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PCR Purification Kit

Fabricante

Cellco Biotec
Código Nome do Produto Apresentação Preço Qtd Disponibilidade
DPK-106XS PCR Purification Kit - XS Pack 10 preparações
R$78,73
Disponível em estoque

DPK-106S PCR Purification Kit - S Pack 50 preparações
R$284,10
Disponível em estoque

DPK-106L PCR Purification Kit - L Pack 250 preparações
R$1.337,52
Disponível em estoque

Purificação de produtos de PCR - Spin column

 

 

PCR Purification Kit

PCR Purification Kit é planejado para purificação de reações de PCR (remoção de oligonucleotídeos, dímeros de oligo, nucleotídeos, proteínas, sal e outras impurezas). A preparação é baseada na tecnologia de membrana de sílica para ligação do DNA em ambiente com concentração salina elevada e eluição em tampão com baixa concentração salina. O kit fornece uma maneira simples e eficiente de purificar DNA circulares ou lineares em ampla faixa de tamanhos (100 bp - 10 kbp) e é otimizada para quantidades de DNA de até 20 µg. Não requer extração com solventes orgânicos ou precipitação e garante rendimentos elevados e reprodutíveis.

 

CONTEÚDO

Binding Buffer

Activation Buffer

Washing Buffer (antes de usar, adicione 96-99% Etanol conforme indicações do frasco)

Elution Buffer

Spin Columns

tubos coletores 2 mL

 

Material Adicional

96-99 Etanol

Isopropanol

Microtubo 1.5 mL

 

Buffer PP-201XS
10 preps
PP-201S
50 preps
PP-201L
250 preps
Binding Buffer 6 mL 30 mL 150 mL
Activation Buffer 1.2 mL 6 mL 30 mL
Washing Buffer Adicione 12 mL Etanol
Volume Final: 15 mL
Adicione 64 mL Etanol
Volume Final: 80 mL
Adicione 160 mL Etanol
Volume Final: 200 mL
Elution Buffer 1 mL 5 mL 25 mL

 

PROTOCOLO

Apenas para uso in vitro!

O uso de isopropanol é recomendado para fragmentos menores de 200 bp ou maiores que 5 kbp. A etapa de lavagem secundária (opcional) minimiza o conteúdo salino do produto purificado, porém reduz significativamente o rendimento dos fragmento de DNA menores de 200 bp.

1a Preparo da Amostra - Padrão

Para fragmentos de DNA entre 200 bp - 5 kbp

  • Adicione 5 volumes de Binding Buffer para 1 volume de DNA amostra e misture bem. Por exemplo, se o seu volume de produto de PCR é 50 µL, adicione 250 µL de Binding Buffer.

 

1b Preparo da Amostra - Alto rendimento

Para fragmentos menores que 200 bp ou maiores que 5 kbp

  • Adicione 3 volumes de Binding Buffer e 2 volumes de Isopropanol para 1 volume de DNA amostra e misture bem. Por exemplo, se o seu volume de produto de PCR é 50 µL, adicione 150 µL de Binding Buffer e 100 µL Isopropanol.

 

2 Ativação da coluna

  • Coloque a spin column em um tubo coletor de 2 mL;
  • Adicione 100 µL de Activation Buffer na coluna;
  • Centrifugue a 10.000 g por 30 s.

 

3 Carregamento da coluna

  • Aplique a mistura gerada na etapa 1 na spin column ativada;
  • Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
  • Descarte o que passou pela coluna.

 

4 Lavagem coluna

  • Adicione 700 µL de Washing Buffer na coluna;
  • Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
  • Descarte o que passou pela coluna;

Lavagem Secundária (opcional): Recomendada apenas para fragmentos de DNA menores que 200 bp, se DNA altamente puro (para sequenciamento, transfecção, etc.) for necessário.

  • Adicione 700 µL de Washing Buffer na coluna;
  • Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
  • Descarte o que passou pela coluna;
  • Centrifugue a 10.000 g por 2 min para remover qualquer resíduo de Washing Buffer.

 

5 Eluição

  • Coloque a coluna em um microtubo de 1.5 mL novo;
  • Adicione 30-50 µL de Elution Buffer ou água no centro da coluna;
  • Incube por 1 min à temperatura ambiente;
  • Centrifugue a 10.000 g por 1 min para eluir o DNA.

 

TRANSPORTE E ARMAZENAGEM

Transportado em temperatura ambiente

Armazenada à temperatura ambiente

 

DOCUMENTOS

MANUAIS E PROTOCOLOS

 PCR Purification Kit - Manual (En)

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- Lysis Buffer (com indicador de pH);
- Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
- RNase A (armazenar à -20°C);
- Activation Buffer;
- Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
- Elution Buffer;
- Binding Columns;
- 2 mL Collection Tubes.
Temperatura ambiente
Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
Manual 1
Manual 2
Manual 3