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Fast-n-Easy Plasmid Mini-Prep Kit

Fabricante

Cellco Biotec
Código Nome do Produto Apresentação Preço Qtd Disponibilidade
DPK-104XS Fast-n-Easy Plasmid Mini-Prep Kit - XS Pack 10 preparações
R$100,90
Disponível em estoque

DPK-104S Fast-n-Easy Plasmid Mini-Prep Kit - S Pack 50 preparações
R$266,83
Disponível em estoque

DPK-104L Fast-n-Easy Plasmid Mini-Prep Kit - L Pack 250 preparações
R$1.274,37
Disponível em estoque

DPK-104XL Fast-n-Easy Plasmid Mini-Prep Kit - XL Pack 4 x 250 preparações
R$3.707,26
Disponível em estoque

Isolamento de DNA baseado em adsorção em coluna de sílica

 

 

 

 

 

 

DESCRIÇÃO

Fast-n-Easy Plasmid Mini-Prep Kit

Fast-n-Easy Plasmid Mini-Prep Kit foi desenvolvido para o isolamento de DNA plasmidal ou cosmidial com elevada pureza a partir de células bacterianas, para subsequente amplificação, sequenciamento, digestão por enzimas de restrição ou transformações. O procedimento de dois passos, lise alcalina e ligação em coluna fornecem uma maneira rápida, fácil e eficiente de isolar DNA sem danos e perdas significativas do produto. O sistema permite a eluição em pequena volume de tampão com baixo teor salino. Etapas de extração por fenol-clorofórmio ou precipitação por etanol não são requeridas. O Lysis Buffer contém um indicador de pH integrado que facilita o controle do pH ótimo para ligação. A ligação eficiente do DNA na coluna ocorre com pH 7.5, o que é indicado pela mudança de cor do indicador para a coloração amarelo brilhante. O kit pode ser usado tanto em microcentrífugas quanto em sistema de bomba vácuo. Ele permite a extração de plasmídeos de DNA de até 10 kb e rendimentos de até 20 µg por preparação. O DNA eluído de altíssima qualidade está pronto para uma variedades de aplicações subsequentes.

 

 

CONTEÚDOVoltar ao topo

  • Lysis Buffer com indicador de pH
  • Neutralization Buffer (antes de usar, adicionar RNAse A e armazenar à 4 °C)
  • RNase A (armazenar à 20 °C)
  • Activation Buffer
  • Washing Buffer (antes de usar, adicione 96-99% Etanol conforme indicações do frasco)
  • Elution Buffer
  • Binding Columns
  • Tubos coletores 2 mL

 

Material adicional

  • 96-99% Etanol
  • Isopropanol
  • Microtubo 1.5 mL
  •  

    Buffer DPK-104XS
    10 preps
    DPK-104S
    50 preps
    DPK-104L
    250 preps
    Lysis Buffer 3.2 mL 16 mL 80 mL
    RNase A 0.8 mg 2 x 4 mg 10 x 4 mg
    Neutralization Buffer 3.2 mL
    adicione 0.8 mg RNAse
    16 mL
    adicione 1 x 4 mg RNAse
    80 mL
    adicione 5 x 4 mg RNAse
    Activation Buffer 1.2 mL 6 mL 30 mL
    Washing Buffer Adicione 12 mL Etanol
    Volume Final: 15 mL
    Adicione 64 mL Etanol
    Volume Final: 80 mL
    Adicione 160 mL Etanol
    Volume Final: 200 mL
    Elution Buffer 1 mL 5 mL 25 mL

     

     

    PROTOCOLOVoltar ao topo

    Apenas para uso in vitro!

     

    A purificação do DNA acontece por simples procedimento de ligação, lavagem e eluição. A etapa de lavagem opcional (secundária) minimiza o conteúdo salino do produto purificado. Antes de iniciar, adicione os seguintes componentes nos respectivos frascos:

    • Adicione RNase A no Neutralization Buffer, conforme indicação na tabela acima e misture bem. O Neutralization Buffer contendo RNAse A deverá ser armazenado à 4 °C.
    • A atividade da RNAse A dissolvida no Neutralization Buffer pode diminuir após vários meses e quantidades pequenas de RNA podem ser co-purificadas. Se houver detecção de RNA após a purificação do plasmídeo, adicione a RNAse A remanescente para reestabelcer a atividade.
    • Adicione Etanol 96-99% (não incluído no kit) no Washing Buffer conforme indicação do frasco. Note que a concentração do Etanol no Washing Buffer poderá diminuir durante o armazenamento prolongado e uma redução no rendimento de DNA poderá ser observada.

     

    1 Recuperação das células e lise

    • Recupere as células a partir de uma cultura celular (1-3 mL) por centrifugação
    • Ressuspenda o pellet bacteriano em 300 µL de Lysis Buffer por pipetagem ou vortex - 1 min

     

    2 Neutralização

    • Adicione 300 µL do Neutralization Buffer (contendo RNase) na amostra e misture gentilmente por inversão do tubo 4-6 vezes (não vortex!);
    • Centrifugue a 10.000 g por 5 min.
    • A cor da mistura de ligação deverá mudar para amarelo brilhante, indicando um pH de 7.5 (requerido para a ligação ótimo do DNA na coluna). A coloração laranja ou violeta indica que o pH > 7.5 e implicará numa adsorção do DNA ineficiente. Neste caso, é recomendado o ajuste do pH pela adição de pequeno volume de acetato de sódio 3M (pH 5.0) antes de prosseguir com as demais etapas.

     

    3 Ativação da coluna

    • Coloque a spin column em um tubo coletor de 2 mL;
    • Adicione 100 µL de Activation Buffer na coluna;
    • Centrifugue a 10.000 g por 30 s.

     

    4 Carregamento da coluna

    • Aplique o sobrenadante da etapa 2 na coluna ativida por decantação ou pipetagem
    • Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
    • Descarte o que passou pela coluna.

     

    5 Lavagem coluna

    • Adicione 500 µL de Washing Buffer na coluna;
    • Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
    • Descarte o que passou pela coluna;

     

    Lavagem Secundária (opcional): Recomendada apenas para fragmentos de DNA menores que 200 bp, se DNA altamente puro (para sequenciamento, transfecção, etc.) for necessário.

    • Adicione 700 µL de Washing Buffer na coluna;
    • Centrifugue a 10.000 g por 30 s;
    • Descarte o que passou pela coluna;
    • Centrifugue a 10.000 g por 2 min para remover qualquer resíduo de Washing Buffer.

     

    6 Eluição

    • Coloque a coluna em um microtubo de 1.5 mL novo;
    • Adicione 30-50 µL de Elution Buffer ou água no centro da coluna;
    • Incube por 1 min à temperatura ambiente;
    • Centrifugue a 10.000 g por 1 min para eluir o DNA.

     

     

    TRANSPORTE E ARMAZENAGEMVoltar ao topo

    Transportado em temperatura ambiente

    Armazenada à temperatura ambiente (exceto RNase (- 20 °C) e Neutralization Buffer após adição da RNAse (4 °C))

     

     

    DOCUMENTOSVoltar ao topo

    MANUAIS E PROTOCOLOS

    Pdf-icon Fast-n-Easy Plasmid Mini-Prep Kit - Manual (En)

    Pdf-icon Fast-n-Easy Plasmid Mini-Prep Kit - Manual (Pt)

    Pdf-icon Fast-n-Easy Plasmid Mini-Prep Kit - MSDS (En)

    Pdf-icon Fast-n-Easy Plasmid Mini-Prep Kit - MSDS (Pt)

    Voltar ao topo

    - Lysis Buffer (com indicador de pH);
    - Neutralization Buffer (adicionar RNAse A antes do uso e armazenar à 4°C);
    - RNase A (armazenar à -20°C);
    - Activation Buffer;
    - Washing Buffer (adicionar Etanol 96-99%, conforme indicação);
    - Elution Buffer;
    - Binding Columns;
    - 2 mL Collection Tubes.
    Temperatura ambiente
    Temperatura ambiente (exceto RNAse – armazenada à -20°C)
    Manual 1
    Manual 2
    Manual 3